1.多肽合成的基本概念?

活性多肽固相配成法是多肽合成有机化学的一个重特大的提升。它的较大特性是无须提纯正中间物质，生成全过程能够 持续开展，从而为多肽合成的自动化技术确立了基本。现阶段自动式多肽的合成，基础全是固相生成。其基础全过程以下：

根据Fmoc有机合成，先将所需生成的总体目标活性多肽的C-端碳水化合物的羧基以共价键方式与一个不可溶的高分子材料环氧树脂相接，随后以这一碳水化合物的羟基做为多肽合成的起始点，同其他的碳水化合物早已活性的羧基功效产生肽键，持续反复这一全过程，就可以获得活性多肽。依据活性多肽的碳水化合物构成不一样，活性多肽后处理工艺方法不一样，提纯方法也是差别。

2.活性多肽情况是怎样?如何保存存储?

人们出示的活性多肽是粉状，一般为灰白，构成不一样，活性多肽粉末状的色调有差别，活性多肽一般长期性储存必须遮光储存，并应储存在-20度，短期内能够 储存在4度。能够 短期内得话是以室内温度运送。

3.怎样融解活性多肽?

由于活性多肽融解非常复杂，一般是先取一点实验，在沒有明确适合的有机溶剂前切勿所有融解。

下列入挑选融解有机溶剂的一般方式 ：

(1)判断活性多肽的正电荷特殊，设置酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1；碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其他碳水化合物的正电荷为0。测算出净电荷数。

(2)假如净电荷数>0，活性多肽为偏碱，自来水融解：如果不融解或溶解度并不大，添加冰醋酸(10%之上)；假如活性多肽还不能溶解，添加小量TFA(25ul)融解，随后添加500ul水稀释液。

(3)假如净电荷数<0，活性多肽为酸碱性，自来水融解；如果不融解或溶解度并不大，添加氢氧化钠(25ul)融解，随后添加500ul水稀释液。

(4)假如净电荷数=0，活性多肽为中性化，一般必须用溶剂如乙腈，乙醇或异丙醇，DMSO等融解。也有人提议必须尿素溶液来融解疏水性挺大的活性多肽。

4.非HPLC提纯的活性多肽和历经HPLC提纯的活性多肽有什么差别?

粗品和除盐级別的活性多肽中残渣为活性多肽和非活性多肽类：如非总长活性多肽和活性多肽后处理工艺的一些原材料如DTT、TFA等；而历经HPLC提纯的活性多肽，仍也有一些残渣存有，在其中的残渣主要是短肽和微量分析TFA。

5.多久的活性多肽为适合?

多肽合成必须考虑到活性多肽的长短，正电荷，亲疏有别水溶性等要素。长短越长，生成粗品的纯净度和产出率都伴随着减少，提纯的难度系数和没法生成的概率马上会大些。自然活性多肽功能分区的编码序列是没法更改的，可是以便活性多肽的圆满生成，有时候迫不得已在功能分区的上中下游提升一些輔助碳水化合物，以改进活性多肽的溶解度和亲疏有别水溶性。假如活性多肽过短，生成也将会不太好，关键难题是生成的活性多肽放前处理方式中有一定的难度系数，5肽下列的活性多肽，一般要有疏水的碳水化合物，不然后处理工艺难度系数增加。十五个氨基酸残基下列的活性多肽一般都能够获得令人满意的产出率和得率。6.怎样从活性多肽编码序列中判断活性多肽的溶解度?

(1)活性多肽中假如带有高占比的疏水性较强的碳水化合物如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，活性多肽没办法融解于水溶性水溶液中或压根不太可能融解。这种碳水化合物不论是提纯或生成，常有将会不太好。

(2)一般状况下疏水性碳水化合物的占比<50%，不可以持续五个持续aa为疏水性，带正电荷的碳水化合物的(正电K,R,H,N-terminus,负电D,E,C-terminus)的占比做到20%，在活性多肽的N或C短假如能提升旋光性碳水化合物，还可以改进溶解度。

7.为何带有Cys,Met,或Trp的活性多肽难生成?

带有Cys,Met,或Trp的活性多肽无法生成，另外难以获得高纯的商品。关键由于这种酯基不稳定，易空气氧化。这种活性多肽的应用和存储都必须需注意，防止不断打开外盖。

8.为何一些多肽的合成产出率或纯净度会较为低?

多肽合成与因子生成有较为大的差别，不可以生成的因子非常少，可是不可以生成的活性多肽常常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这种碳水化合物比邻或反复时，多肽链在生成全过程中不可以彻底伸展融解，生成高效率降低。下列几类情况，生成高效率和物质的纯净度都较为低，如：反复Pro,Ser-Ser，反复Asp，4个持续Gly等.

9.活性多肽是怎样提纯的?

活性多肽提纯一般应用反相柱(如C8，C18等)，214nm。缓存管理体系一般为含TFA的有机溶剂，pH2.0。BufferA为含0.1%TFAinddH2O，BufferB为1%TFA/ACN/pH2.0。提纯前要BufferA融解；假如融解不太好，用BufferB融解后，随后用BufferA稀释液；对疏水性强的活性多肽，有时候还必须添加小量的FormicAcid或冰醋酸。HPLC剖析活性多肽粗物质，假如活性多肽不长(15aa下列)，一般也有峰顶，峰顶一般为总长物质；针对20aa之上的长肽，要是没有峰顶，HPLC需配搭Mass来判断含量，从而明确哪家峰是所需生成的活性多肽.

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